1：空白對照　陰性對照　pTRV-CRTISO　農(nóng)桿菌侵染

農(nóng)桿菌侵染本氏煙草35　天表型（兩個均為上圖描述）

　　煙草在線據(jù)云南煙葉信息網(wǎng)站報道　　類胡蘿卜素異構(gòu)酶（CRTISO）基因是植物中類胡蘿卜素合成的關(guān)鍵基因之一，它催化多反式番茄紅素形成多順式番茄紅素，該基因表達量降低能夠?qū)е娄?胡蘿卜素大量積累。煙草中的類胡蘿卜素屬于萜烯類化合物，其含量與煙葉香氣密切相關(guān)。《中國煙草學(xué)報》2014年第6期上發(fā)表的“煙草類胡蘿卜素異構(gòu)酶基因的克隆及功能研究”表明，CRTISO基因沉默抑制下游基因表達，進而抑制了胡蘿卜素降解反應(yīng)的進行，揭示了該基因在煙草類胡蘿卜素合成通路中的作用，為通過基因工程手段培育優(yōu)良煙草品種奠定理論基礎(chǔ)。

　　該研究從普通煙草的cDNA中克隆獲得CRTISO基因編碼區(qū)（CDS），將CRTISO基因的部分序列插入煙草脆裂病毒（TRV）載體中，構(gòu)建重組載體pTRV2-CRTISO。通過TRV病毒誘導(dǎo)的基因沉默（VIGS）系統(tǒng)抑制本氏煙草（Nicotiana　benthamiana）CRTISO基因表達，同時利用實時熒光定量PCR檢測CRTISO下游基因的表達量變化。結(jié)果表明，pTRV-CRTISO載體侵染的煙草葉片出現(xiàn)黃色斑點；CRTISO基因的沉默導(dǎo)致下游番茄紅素ε環(huán)化酶（ε-LCY）、番茄紅素β環(huán)化酶（β-LCY）和胡蘿卜素β-環(huán)羥化酶（β-OHase）基因表達量降低，抑制了胡蘿卜素降解反應(yīng)的進行，可能會導(dǎo)致煙草中胡蘿卜素的累積，使煙葉顏色發(fā)生改變。這為進一步研究煙草類胡蘿卜素合成代謝途徑中各基因的功能奠定了良好的基礎(chǔ)。

　　類胡蘿卜素在煙葉中的轉(zhuǎn)化、積累和降解與煙葉品質(zhì)和香氣密切相關(guān)，提高煙葉中的類胡蘿卜素含量不僅能夠提高煙葉品質(zhì)，還可以改善煙葉香吃味。但類胡蘿卜素的合成代謝受光照、溫度和遺傳等多種因素的調(diào)節(jié)控制，因此，通過分子手段選育類胡蘿卜素含量高的優(yōu)良煙草品種將是今后深入究的方向。